产品介绍

Cell Navigator®荧光成像试剂盒是一套用于标记细胞膜、溶酶体、线粒体和细胞核等亚细胞器的荧光成像工具。该试剂盒通过活细胞器的选择性标记，为研究细胞事件提供了一种强有力的方法。本款特异性线粒体橙色荧光标记试剂盒采用专利染料，该疏水性化合物通过线粒体膜电位梯度选择性积聚于活细胞线粒体中，其特有的细胞滞留基团可长期维持线粒体内荧光信号，显著提升染色效率。该标记方案操作简便、耗时短，可适配微孔板检测、免疫细胞化学及流式细胞术等多种平台，适用于细胞粘附、趋化运动、多药耐药、细胞活力、凋亡及毒性检测等研究。试剂盒提供所有必需组分及优化标记方案，兼容增殖与非增殖细胞、悬浮与贴壁细胞等多种细胞类型。

注意事项

该产品可以在染色后，进行固定，再观察

实验步骤概述

1.细胞准备

2.加入MitoLite™ orange工作液

3.37°C孵育30分钟至2小时

4.使用荧光显微镜观察（激发/发射波长：540/590 nm，TRITC滤光片组）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有组分

工作液配制方法

取20 µL 500× MitoLite™ orange（组分A）加入10 mL活细胞染色缓冲液（组分B）中混匀，避光保存备用

注意：1.20 µL 500× MitoLite™ orange 可满足1块96孔板的染色需求

          2.工作液需现配现用，避免光照

合适的工作浓度需根据具体应用调整；染色条件应依据细胞/组织类型及探针渗透性优化

贴壁细胞染色方案：

1.使用96孔黑色壁/透明底培养板（每孔100 µL）或在装有适当培养基的培养皿中的盖玻片上培养细胞

2.当细胞达到所需融合度时，加入等体积的MitoLite™ orange工作液

3.讲细胞在37°C、5% CO2培养箱中孵育30分钟至2小时

4.将Mitolite™ orange工作溶液替换为20 mM Hepes的Hanks缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如，生长培养基按1:1浓度配制的缓冲液）。

5.使用配备TRITC 滤光片组（激发/发射=540/590 nm）的荧光显微镜观察细胞，

注意：若细胞染色不足，建议增加标记浓度或延长孵育时间以使染料积累

悬浮细胞染色方案：

1.以1000 rpm离心细胞5分钟获得细胞沉淀，吸除上清液

2.将细胞沉淀轻柔重悬于预热（37°C）的生长培养基中，加入等体积的MitoLite™ orange工作液

3.在37°C、5% CO2培养箱中孵育30分钟至2小时

4.将Mitolite™ orange工作溶液替换为HH缓冲液或自选缓冲液

5.使用TRITC 滤光片组观察细胞

注意：1. 染色不足处理同贴壁细胞方案

          2.悬浮细胞可用经BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理的盖玻片固定后，按贴壁细胞方案染色

（注：本方案中所有操作步骤均需在避光条件下进行）